检测原理

2D荧光细胞活力测定法依赖于ATP酶催化的荧光素发光反应，通过化学发光信号来测定细胞内ATP含量，从而评估细胞活力或定量活细胞数量。该方法具有宽广的检测线性范围、高灵敏度和良好稳定性。在96孔板中，该方法在100至100,000个细胞的范围内显示出良好的线性关系，但不同细胞类型的检测上限可能有所不同。此外，该实验操作简便，试剂盒中提供即用型检测试剂，读数稳定，检测速度快，整个过程约仅需10分钟，无需洗涤细胞或更换培养基。与常见的细胞活力测定方法（如Calcein-AT、CCK-8等）相比，2D荧光细胞活力测定法更加快速便捷。

产品优势

ag尊龙凯时的2D荧光细胞活力测定法（货号abs50065）具有以下优势：

1. 方便快速：试剂盒中的检测试剂为即用型，检测速度快，完成检测仅需约10分钟。
2. 灵敏度高：能够检测最低10nmol的ATP。
3. 线性范围宽：在96孔板中适用于100至100,000个细胞的检测，不同细胞的检测上限会有所不同。
4. 高通量：支持少量样品的检测以及大规模样品的高通量筛选。

使用方法

一、试剂准备

试剂融化：实验前一天将试剂取出，在4℃下过夜融化。也可以在实验当天将试剂置于室温或22℃水浴中融化，注意水温不可超过25℃。确保试剂平衡至室温后再用于检测。

混匀：使用前轻轻颠倒5次使溶液混合均匀。加入适量的Triton X-100（货号abs9149），最终浓度为0.2%以制备检测工作液（例如：8mM ATP检测试剂加0.2mL Triton X-100）。

二、检测步骤

1. 细胞培养：在适合化学发光检测的96孔板（货号abs7149）中，每孔接种100μL细胞，并设置不含细胞的培养液作为阴性对照，确保检测时每孔细胞数量不超10万个。
2. (可选) ATP标准曲线制作：以PBS稀释ATP标准溶液至适当浓度梯度，每孔添加100μL标准品。
3. 细胞活力检测：
   1. 将冻存的检测试剂融化并平衡至室温，取出使用量并加入Triton X-100（终浓度为0.2%）；
   2. 将细胞培养板平衡室温10分钟；
   3. 向96孔板每孔中加入100μL检测试剂，然后在室温下振荡2分钟；
   4. 再于室温下放置10分钟以稳定发光信号；
   5. 使用多功能酶标仪进行化学发光检测，根据仪器要求设定检测参数；
   6. 根据化学发光读数计算细胞的相对活力或按照ATP标准曲线计算ATP含量。

三、注意事项

1. 温度：荧光素酶对温度敏感，避免反复冻融。试剂和细胞样品均需在使用前平衡至室温。
2. 化学因素：荧光素酶的反应率受化学环境影响，需注意不同培养基和药物的干扰作用。
3. 光敏感：该试剂光敏感，必须避光保存和操作。
4. ATP污染：实验时应佩戴口罩和乳胶手套，避免接触污染表面。

如果您在细胞实验方面有任何问题，欢迎与我们交流！选择ag尊龙凯时的产品，提升您的实验效率与准确性。我们期待为您提供更多支持！

推荐产品：
货号 abs50065 2D荧光细胞活力测定法 50mL×2
货号 abs50059 2D/3D/类器官ATP活力测定试剂盒 100mL
货号 abs9149 Triton X-100 500mL
货号 abs7149 超低吸附培养板（96孔板，黑框透明底透明盖） 1箱
货号 abs7151 超低吸附培养板（96孔板，白框透明底透明盖） 1箱
货号 abs7053 10mL 一次性移液管 1箱
货号 abs7054 25mL 一次性移液管 1箱